モローニー・マウリン・サルコマウイルスによって変異された細胞における変異遺伝子産物の検出

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• ウイルス学 ウイルス学 ウイルス学
• 腫瘍学 腫瘍学

背景:

• モローニー・マウリン・サーコマウイルス (M-MuSV) は,マウスのサーコマを引き起こすことが知られているレトロウイルスです.
• ウイルス変異遺伝子であるv-mosは,M-MuSV誘発の腫瘍形成に関与しています.

研究 の 目的:

• v-mos変容遺伝子がコードするタンパク質を識別し,特徴づけること.
• 変形細胞におけるv-mosタンパク質の翻訳後の改変と発現レベルを調査する.

主な方法:

• 合成v-mosペプチドに対する抗血清の生産.
• 放射性標識 (35S-メチオニン,32P) 細胞抽出物を用いた免疫プレシピテーション
• ペプチドマッピングとパルスチェイス実験.
• M-MuSVとHT1-MuSVの変形細胞と未感染細胞におけるタンパク質発現の分析.

主要な成果:

• 特定の抗血清剤は,M-MuSVが変異した細胞で,v-mos遺伝子の産物に対応する ~37 kDaのタンパク質ダブルレットを認識しました.
• v-mosタンパク質は,複数のリン酸化部位 (phosphoserine) を有するフォスフォタンパク質です.
• パルスチェイス実験では,下帯が上帯の前駆体であり,おそらくリン酸化によるものであることが示された.
• 同様のモスタンパク質は,HT1-MuSVが変異した細胞で見つかったが,NIH/3T3細胞は見つからなかった.
• モスタンパク質の濃度は,確立された変形系では低かったが,急性感染細胞では一時的に高かったが,これは細胞死亡率と一致した.

結論:

• v-mos遺伝子産物は,約37 kDaのフォスフォタンパク質である.
• 翻訳後の改変,おそらくはリン酸化により,最初の翻訳製品が成熟した形に変換されます.
• モスタンパク質の高過渡的発現は,急性M-MuSV感染と細胞死と相関しており,ウイルス腫瘍形成と細胞病理学における役割を示唆しています.