ドロソフィラのRNAポリメラーゼIIロカスからの配列の分子クローニングは,P要素トランポゾンタグによる

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• 遺伝学 遺伝学とは
• 発達生物学 発達生物学とは

背景:

• ドロソフィラ・メラノガスターのRNAポリメラーゼIIロカス (RpIIC4) は,遺伝子転写に不可欠である.
• P要素のような転置可能な元素は,遺伝子に挿入することで変異を引き起こす可能性があります.
• ハイブリッド・ディスゲネシス (Hybrid dysgenesis) は,P要素の活動に関連したドロソフィラの現象である.

研究 の 目的:

• ドロソフィラのRNAポリメラーゼIIロカスにおける致死性突然変異の遺伝的原因を特定する.
• P要素の挿入を用いて,遺伝子的に定義された位置をクローンするための新しい方法を開発する.

主な方法:

• RPIIロカスからP要素挿入と隣接するゲノムDNAを含むラムダファグクローンの分離.
• P要素の配列をハイブリッド化し,挿入領域と側面領域を特定する.
• ポリテン染色体の分析により,変異の細胞遺伝的位置を決定する.
• 新しいP要素挿入の生成とリバータントの分析.

主要な成果:

• RpIIC4ロカスにおける致死性突然変異が特定され,P要素の挿入に関連していた.
• RpIIロキュスの10kBのゲノムDNA断片の中に,1.3kBのP要素挿入が見つかりました.
• 非P配列は,RpIIC4.4の既知の位置であるポリテン染色体帯10Cにハイブリッド化しました.
• 致死性突然変異のリバータントは,P元素配列のロカスでの喪失も示した.
• 場所内の複数のP要素挿入部位が特定されました.

結論:

• P要素の挿入は,ドロソフィラのRNAポリメラーゼIIロクスの致死性突然変異の原因である.
• ドロソフィラの遺伝子的に定義された位置をクローンすることは,P要素の変異と隣接するDNA配列の回収によって達成できます.
• この方法は,ドロソフィラの遺伝子クローンと遺伝子分析のための強力なツールを提供します.