高効率のDNA媒介による霊長類の細胞の変容

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• 細胞生物学 細胞生物学
• 遺伝学 遺伝学とは

背景:

• 哺乳類の細胞系は,遺伝子機能と病気の研究に不可欠です.
• 効率的な遺伝子転送方法は,哺乳類の細胞における遺伝子操作に不可欠です.
• 支配的な選択マーカーは,成功して移植された細胞の識別を容易にする.

研究 の 目的:

• 多様な哺乳類の細胞系統の安定した変換効率を,支配的な選択可能なマーカーを用いて評価する.
• 類人長類の系統を含む,異なる種と細胞タイプにおける変換周波数を比較する.
• 遺伝子研究における潜在的な使用のために,高トランスフェクション効率の細胞系を特定する.

主な方法:

• Escherichia coli xanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HPRT) またはTn5アミノグリコシドフォスフォトランスフェラーゼ (APH) をコードする再結合ベクターが構築されました.
• これらのベクトルは,ヒトのHeLa,SV40変異したキセロダーマ・ピグメンツウム,アフリカの緑猿の腎臓CV-1細胞を含むいくつかの哺乳類の細胞系に導入されました.
• 安定した変換周波数は,選択可能なマーカーを発現する細胞を選択することによって決定されました.

主要な成果:

• ヒューマンHeLaとSV40で変換されたキセロダーマ・ピグメンツウム細胞は,少なくとも10−3 (0.1%) の安定した変換周波数を達成しました.
• CV-1アフリカの緑猿の腎臓細胞系は,安定した変容頻度がかなり高く,6X10−2 (6%) に達した.
• これらの結果は,異なる哺乳類の細胞タイプ間のトランスフェクション効率の変動性を示している.

結論:

• 哺乳類の細胞系は,HPRTやAPHのような支配的な選択性マーカーを使用して安定的に変形することができます.
• CV-1細胞系は,安定した変異のための例外的な効率を示し,遺伝学の研究のための貴重なモデルとなっています.
• この発見は,哺乳類のシステムにおける遺伝子転送実験を最適化するために,細胞系選択の重要性を強調しています.