ウサギのβ-グロービン遺伝子の転写に必要なDNA配列の局所化 in vitro

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• 遺伝子規制 遺伝子規制
• バイオケミストリー バイオケミストリー

背景:

• 遺伝子転写の理解は,分子生物学にとって根本的なものです.
• ウサギのβ-グロービン遺伝子は,真核生物の遺伝子発現を研究するためのモデルシステムとして機能します.
• 転写開始部位の上流の特定のDNA配列は,遺伝子活動を調節する上で重要な役割を果たします.

研究 の 目的:

• HeLa細胞システムを用いてウサギのβ-グロービン遺伝子のインビトロ転写を調査する.
• 正確な転写開始に不可欠な特定のDNA配列を特定する.
• CCAATボックスやゴールドバーグ-ホーグネスボックスのような保存されたプロモーター要素の役割を明らかにする.

主な方法:

• クローンされたウサギのβ-グロービン遺伝子断片を用いたin vitro転写アッセイ.
• 規制配列をマッピングするためにデリレーション変異体の分析.
• トランスクリプション開始部位とトランスクリプト終了部位の識別.

主要な成果:

• 特定のトランスクリプトは,キャップサイトにある5'端で生成されました.
• カップサイトとCCAATボックスは,特定の in vitro 転写に不可欠ではありませんでした.
• Goldberg-Hogness box を含む,キャップサイトから上流で34から20の核酸の間の配列が転写に必要でした.
• ゴールドバーグ-ホーグネスボックスの下流の削除は,RNAポリメラーゼIIがこの元素に結合することを示唆し,開始部位をシフトさせた.

結論:

• ゴールドバーグ・ホーグネス・ボックス (Goldberg-Hogness box) は,ウサギのベータ・グロービン遺伝子の特定のインビトロ転写開始の主な決定因子である.
• RNAポリメラーゼIIは,ゴールドバーグ-ホーグネスボックスと結合し,約30の核酸を下流で転写を開始する可能性がある.
• 正確な開始場所の選択におけるシーケンスの特異性は限られているようです.