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再結合サブユニットから転写活性RNAポリメラーゼI誘発因子SL1の組み立て

J C Zomerdijk¹, H Beckmann, L Comai

¹Howard Hughes Medical Institute, Department of Molecular and Cell Biology, University of California, Berkeley 94720-3204.

Science (New York, N.Y.)

|December 23, 1994

まとめ

研究者らは,リボソームのRNA合成に不可欠なSL1複合体を再構成した. 再結合タタ結合タンパク質 (TBP) とTAFIS 110,63,48は共に活性複合体を形成し,転写のための必要性と十分性を証明した.

科学分野:

分子生物学は分子生物学である.
遺伝子規制遺伝子規制
タンパク質生化学タンパク質生化学

背景:

リボソーマルRNA (rRNA) 合成は細胞成長に不可欠であり,主にRNAポリメラーゼIによってオーケストラされます.
プロモーター選択性因子SL1は,RNAポリメラーゼIによるrRNA合成を開始するために不可欠です.
SL1は,TATA結合タンパク質 (TBP) と3つのTBP関連因子 (TAFIs) を含む: TAF110,TAF63,TAF48.

研究の目的:

機能的なSL1複合体のインビボおよびインビトロ組立を調査する.
SL1 複合活動に必要な及び十分な構成要素を決定する.
rRNA遺伝子転写をサポートする再結合TAFIとTBPの役割を特徴付ける.

主な方法:

TBPとTAFIの再結合発現と浄化 (110, 63, 48)
再結合タンパク質を用いたSL1複合体のインビトロ組立.
ヒトリボソームRNA遺伝子プロモーターを用いた vivoおよびin vitro転写アッセイ.
再構成されたSL1複合体と内生的なSL1複合体間の転写活性の比較分析.

主要な成果:

機能的なSL1複合体は,再結合TBPとTAFI 110,63,48から組み立てられた.
4つの成分をすべて含む再構成されたSL1複合体は,内生SL1と比較できるトランスクリプションをサポートする活性を示した.
TBPが欠けていた部分複合体は, in vitroで転写支持活性が著しく低下したことを示した.
TBPとTAFI 110,63,48は,活性SL1.1を再構成するために必要かつ十分であることが判明しました.

結論:

この研究では,再結合TBPとTAFIを使用して,転写活性SL1複合体を成功裏に再構成しました.
これらの発見は,TBP,TAF110,TAF63,TAF48がSL1.1の重要な構成要素であることを確認しています.
再構成されたSL1複合体は,rRNA遺伝子転写開始のさらなるメカニズム研究のための貴重なツールを提供します.

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