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変異したT4ライソ酵素におけるサッカリド歪みを持つ共性酵素基質中間体
R Kuroki1, L H Weaver, B W Matthews
1Institute of Molecular Biology, Howard Hughes Medical Institute, University of Oregon, Eugene 97403.
Science (New York, N.Y.)
|December 24, 1993
まとめ
ファージT4リゾーザイム (T4L) 変異は,共性酵素-基板添加物を明らかにし,オキシカルボニウムイオン理論に異議を唱える. この発見は,リゾ酵素作用におけるグリコシド結合の裂解のための二重位移りメカニズムを支持する.
科学分野:
- バイオケミストリー バイオケミストリー
- 酵素学 酵素学とは
- 構造生物学 構造生物学とは
背景:
- リスオ酵素の作用メカニズムは議論されており,グリコシル酵素の中間物質はオキシカルボニウムイオンまたは共性添加物として提案されています.
- グライコシダゼに関する以前の研究と理論的モデルでは,共振付加がより可能性が高いことを示唆していた.
研究 の 目的:
- フェーグT4ライソジーム (T4L) の作用におけるグリコシル酵素中間物質の性質を調査する.
- T4Lの触媒メカニズムをサイト指向型変異性により解明する.
主な方法:
- T4Lのサイト誘導性変異,特にスレオニン26をグルタミン酸に変異させる.
- 変異したT4L製品複合体の結晶学分析.
- 構造の決定と野生型のT4Lとの比較.
主要な成果:
- 変異したT4L酵素が作られ,バクテリアの細胞壁を割ったが,その製品は共性結合を維持した.
- 結晶学的分析は,製品と導入されたグルタミン酸26との共性結合を明らかにした.
- 結合された砂糖環は著しい歪みを示し,触媒分解における基質歪みの役割を支持した.
結論:
- この研究は,T4L作用における重要な中間物質として,共性酵素基板添加物の証拠を提供します.
- この発見は,構成を保持しながら,グリコシド結合の分裂のための二重の位移メカニズムを支持する.
- サブストラット歪みは,ライソジームの触媒効率の重要な要因として強調されています.