酵母REV1タンパク質のデオキシチチジルトランスファーゼ活性

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• 遺伝学 遺伝学とは
• バイオケミストリー バイオケミストリー

背景:

• Saccharomyces cerevisiaeのDNA損傷変異は,REV1,REV3およびREV7遺伝子に依存しています.
• Rev3とRev7はDNAポリメラーゼ-ゼータ (Pol-zeta) のサブユニットであり,トランスレション合成に不可欠である.
• Rev1はE. coliのUmuCと同質性を共有しており,不明なメカニズムでトランスレション合成に関与しています.

研究 の 目的:

• Rev1タンパク質の酵素活性を調べるために.
• DNA損傷耐性および変異性におけるRev1の役割を明らかにする.
• DNA修復経路におけるRev1とPol-zetaの相互作用を理解する.

主な方法:

• 精製されたRev1タンパク質のデオキシチチジルトランスファーゼ活性を in vitroで評価する.
• テンプレート依存のDNAプライマー延長アッセイを用いて.
• 異なるDNAポリメラーゼ (Pol-zetaとPol-alpha) によるプライマー拡張効率の特徴.

主要な成果:

• Rev1タンパク質は,dCTPからDNAプライマーの3'端にデオキシチチジンモノフォスファート (dCMP) の残留物のテンプレート依存移転を触媒化する.
• 効率的なdCMP挿入は,テンプレートベースサイトの反対側に発生しました.
• 重要な挿入は,小さいものの,テンプレートグアニン,アデニン,ウラシル塩基の反対側に発生しました.
• 基礎部位の反対側のサイトシン挿入は,Pol-zetaによって効率的に拡張されたプライマー終端を作り出したが,酵母Pol-alphaによって拡張されることはなかった.

結論:

• Rev1は,DNA損傷の突然変異に不可欠な新しいデオキシチチジルトランスファーゼ活性を持っています.
• この活動により,基底部と反対側のサイトシンが挿入され,Pol-zeta.によってその後の拡張が可能になります.
• Rev1の機能は,トランスレション合成経路に不可欠であり,特にDNAの損傷をバイパスする.