5'端で標識された核細胞のDNAase l-感受性の部位をマッピングする

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• クロマチンの構造 クロマチンの構造
• バイオケミストリー バイオケミストリー

背景:

• 核細胞は,真核生物のDNA包装の基本的な単位である.
• ヒストン-DNAの相互作用を理解することは,遺伝子調節にとって極めて重要です.

研究 の 目的:

• HeLa細胞核細胞内のDNAのアクセシビリティをDNAアゼI消化にマッピングする.
• 核細胞構造の中で保護されているか,または露出している特定のDNA配列を識別する.

主な方法:

• 5'DNAのステイキオメトリックラベリングは,ラムダ-32P-ATPとポリヌクレオチドキナーゼを用いて,孤立したHeLa細胞核細胞に終わります.
• DNAase I.で標識された核細胞の酵素による消化.
• 場所のアクセシビリティを決定するためにDNAの割れ方パターンの分析.

主要な成果:

• 核個体は,約10個のヌクレオチドごとに潜在的DNAase I分裂部位を呈する.
• 5'端から20,40,50,100,120および130のニュクレオチドにある特定の部位は,割れに優れている.
• 30と110の нуклеотиドの部位は不利であり,80の нуклеотиドの部位は事実上割れていない.

結論:

• DNAase I分裂パターンは,核細胞内のDNAアクセシビリティの高解像度マップを提供します.
• これらの発見は,ヒストン-DNA相互作用と染色体内のDNA折り畳みのモデルを制限しています.