抑制剂支架作为新的等位基因特异性激酶基质
Brian C Kraybill1, Lisa L Elkin, Justin D Blethrow
1Department of Cellular and Molecular Pharmacology, Box 0450, University of California- San Francisco, San Francisco, California 94143, USA.
Journal of the American Chemical Society
|October 10, 2002
概括
研究人员开发了新的三酸盐基质类似物,用于直接标记酶蛋白标. 这些新的类似物比以前的版本更直角,使得即使在复杂的细胞环境中也可以进行特定的激酶研究.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 化学生物学 化学生物学
背景情况:
- 蛋白质激酶超级家族非常庞大 (>500个人类激酶),这使得信号网络的阐明具有挑战性.
- 目前用于激酶研究的方法在特异性和效率方面存在局限性.
- 对酶蛋白质基质进行有针对性的标记对于理解细胞信号传递至关重要.
研究的目的:
- 开发一种新型的直角三酸基质类型,用于直接标记特定的酶蛋白标.
- 与ATP相比,评估这些新型类型的基质特异性和催化效率.
- 为了证明这些类似物在复杂的生物样本中用于酶标记的实用性.
主要方法:
- 基于Src家族激酶抑制剂PP1结构的正交三酸盐基质类似物的合成,包括3-基醇胺三酸盐 (3-基-PPTP).
- 酶分析以确定3--PPTP对各种激酶的基质偏好和催化效率 (kcat/KM),包括突变p38,v-Src和CDK2/cyclin E.
- 基因酶蛋白质基质标记实验使用[-(32) P]-3-基-PPTP在小鼠脏细胞溶解物中,以评估对野生类型基因酶和细胞ATP水平的正交性和效率.
主要成果:
- 发现3--PPTP是突变p38的基质,并且被v-Src (T338G) 偏好于ATP和N(6)-() -ATP.
- 对于CDK2 (F80G) /环林E,3--PPTP的催化效率与ATP相当,主要是由于KM明显较低.
- 无论是3--PPTP还是3--PPTP,在标记来自小鼠脊髓细胞的野生类型激酶时,都比N(6)-() -ATP具有超过4倍的正交性.
- [gamma-(32) P]-3-基-PPTP在细胞溶解物中有效标记了CDK2 (F80G) / E的直接蛋白质基质,即使细胞ATP度高.
结论:
- 一个新的类型的高度直角三酸基质类似物已被开发用于特定的酶标记.
- 这些类似物在不同的激酶中表现出广泛的基质接受,这表明对整个激酶超级家族的潜在概括性.
- 开发的类似物为剖析激酶信号网络和在复杂细胞系统中识别直接激酶基质提供了强大的工具.
