使用小分子微阵列和以多样性为导向的合成,发现了一种转录因子的抑制剂
Angela N Koehler1, Alykhan F Shamji, Stuart L Schreiber
1Department of Chemistry and Chemical Biology, Harvard Biophysics Program, Howard Hughes Medical Institute, Harvard Institute of Chemistry and Cell Biology, Harvard University, 12 Oxford Street, Cambridge, Massachusetts 02138, USA.
研究人员确定了哈普胺B,这是酵母转录因子Hap3p的强有力的小分子抑制剂. 这种化学探测器有效地模仿了基因淘汰效应,在非发酵条件下揭示了Hap3p调节的基因.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 酵母遗传学 酵母遗传学
- 化学生物学 化学生物学
背景情况:
- 哈普2/3/4/5p复合体是酵母中的一个重要的转录因子.
- 识别转录因子子子单元的特定配体可以为研究基因调节提供有价值的工具.
研究的目的:
- 发现和描述酵母转录因子子Hap3p的小分子配体.
- 研究已识别的连接体的细胞效应和结构-活性关系.
主要方法:
- 小分子微阵列选用于识别Hap3p配体.
- 表面等离子体共振用于结合亲和度 (KD) 确定.
- 记者基因测试以评估转录抑制.
- 合成哈普胺A衍生物以探索结构-活性关系.
- 全基因组转录概况,以比较化学和遗传乱.
主要成果:
- 哈普胺A被确定为一个Hap3p配体,KD为5.03μM,并抑制了GDH1-lacZ记者基因激活.
- 哈普胺B,一种衍生品,显示显著增加的效力,KD为330nM.
- 转录分析显示,哈普胺B模仿了hap3删除突变的效果,在非发酵条件下降低了特定基因的调节.
- 在非发酵生长过程中被Hap3p调节的基因被确定.
结论:
- 小分子微阵列对于发现向转录因子的细胞透性配体是有效的.
- 哈普胺B作为一种有价值的化学遗传工具,用于探测酵母中的Hap3p功能.
- 这种方法在特定的代谢条件下成功识别了由Hap3p调节的基因.
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