通过基因位点和突变遗传学 (GSSM) 创建一种高效,高分离选择性酸酶
Grace DeSantis1, Kelvin Wong, Bob Farwell
1Diversa Corporation, 4955 Directors Place, San Diego, California 92121, USA.
Journal of the American Chemical Society
|September 18, 2003
概括
使用基因位点和突变发生 (GSSM) 的定向进化增强了一种化酶. 这种改进的酶有效地产生了利皮特的关键前体,具有高反体过剩.
科学领域:
- 生物催化剂是一种生物催化剂.
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
- 药用化学 医学化学
背景情况:
- 亚酶酶催化药物合成的关键反应.
- 合成 (R) -4--3-基黄油酸,一个Lipitor的前体,需要高的enantioselectivity.
- 现有的利酶在工业基质度上表现出对酶体过量的局限性.
研究的目的:
- 为了提高利皮特前体合成的利酶酶的酶选择性和效率.
- 应用基因位点和突变发生 (GSSM) 用于定向的酶进化.
- 通过高通量选来识别优质利酶变体.
主要方法:
- 用基因位点和突变发生 (GSSM) 来产生多种酸酶变体.
- 为快速查而开发了一种新型的高通量质谱测试法.
- 在高基质度下,对酶变异的活性,酶选择性和生产力进行了评估.
主要成果:
- 野生型利酶在3M基底度下产生了87.6%的反体过剩,产生了所需的产品.
- 基因位点和突变遗传学发现了改进的变体.
- 阿拉190His突变物在3M基底负荷下实现了98.5%的反体过剩和619gL-1d-1的体积生产率.
结论:
- GSSM是一种有效的策略,用于提高工业应用中的酶性能.
- 阿拉190His利酶突变体代表了关键药物中间体的立体选择性合成的重大进步.
- 这种进化的酶提供了一个更有效和选择性的生物催化途径,以降低胆固醇的药物前体.
