阿里斯托洛合成酶:通过局部导向突变发生的活性部位残留物的机械分析
Brunella Felicetti1, David E Cane
1Department of Chemistry, Box H, Brown University, Providence, Rhode Island 02912-9108, USA.
Journal of the American Chemical Society
|June 10, 2004
概括
西 (Penicillium roqueforti) 的阿里斯托洛基因合成酶突变改变了产品比率,增加了中间的生殖细胞A. Tyr-92突变证实了这一点.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 酶学 是一种酶学.
- 有机化学 有机化学
背景情况:
- 阿里斯托洛合成酶催化法纳西二酸盐的循环.
- 了解这些酶的催化机制和基质特异性至关重要.
- 之前的研究表明,一个保留的Mg2+结合域在催化中起作用.
研究的目的:
- 研究特定氨基酸残留在阿里斯托洛基因合成酶活性中的作用.
- 阐明法纳西二酸盐循环的催化机制.
- 确定参与产品形成和中间稳定的关键残留物.
主要方法:
- 在 *Penicillium roqueforti* 和 *Aspergillus terreus* aristolochene合成中保存残留物的位点定向突变发生.
- 酶分析以确定动力参数 (kcat,Km) 和产品分布.
- 使用染色学和质谱学分析反应产品.
主要成果:
- *P. roqueforti*阿里斯托洛基因合成酶的突变改变了产物比率,增加了生殖A的形成.
- 特定的突变 (例如,E252Q) 导致了A. germacrene的独家生产.
- Y92F突变显示了减少的催化效率,但保持了阿里斯托洛基因的产生,排除了Tyr-92作为活性部位的易斯酸.
结论:
- 在阿里斯托洛基因合成酶中保存的残留物对于控制产品特异性至关重要.
- 催化机制涉及生殖A中间体的质子化.
- 泰尔-92不是负责这一质子化步骤的易斯酸活性位点.


