Jove
Visualize
联系我们
JoVE
x logofacebook logolinkedin logoyoutube logo
关于 JoVE
概览领导团队博客JoVE 帮助中心
作者
出版流程编辑委员会范围与政策同行评审常见问题投稿
图书馆员
用户评价订阅访问资源图书馆顾问委员会常见问题
研究
JoVE JournalMethods CollectionsJoVE Encyclopedia of Experiments存档
教育
JoVE CoreJoVE BusinessJoVE Science EducationJoVE Lab Manual教师资源中心教师网站
使用条款与条件
隐私政策
政策

相关实验视频

大肠杆菌的IspH蛋白:研究铁硫集群的实施和催化.

Tobias Gräwert1, Johannes Kaiser, Ferdinand Zepeck

  • 1Contribution from the Lehrstuhl für Organische Chemie und Biochemie, Technische Universität München, Lichtenbergstrasse 4, D-85747 Garching, Germany.

Journal of the American Chemical Society
|October 8, 2004
PubMed
概括

过度表达铁硫集群基因显著提高了大肠杆菌IspH酶活性,这对于异类生物合成至关重要. 这种增强需要特定的黄素度,并揭示了IspH蛋白内关键的 [3Fe-4S](+) 集群.

相关实验视频

相关概念视频

您也可能阅读

相关文章

通过共同作者、期刊和引用图与本文相关的文章。

排序
Same author

Photochemistry of CryB from Rhodobacter sphaeroides.

Photochemistry and photobiology·2026
Same author

Fluorinated Tryptophan Derivatives for Photo-CIDNP NMR.

The journal of physical chemistry. B·2026
Same author

Optically detected and radio wave-controlled spin chemistry in flavoproteins.

Nature biotechnology·2026
Same author

Reverse Fosmidomycin Analogs as Bisubstrate Inhibitors: Binding Mode Elucidation and Mechanistic Insights.

Journal of medicinal chemistry·2026
Same author

Timing of Redox Imbalances in Cardiac Surgery.

European journal of cardio-thoracic surgery : official journal of the European Association for Cardio-thoracic Surgery·2026
Same author

Absolute Bioavailability and Absorption, Distribution, Metabolism, and Excretion of [<sup>14</sup>C]Xevinapant, a Potent, Oral, Small-Molecule IAP Inhibitor.

Clinical pharmacology in drug development·2026

科学领域:

  • 生物化学 生物化学
  • 分子生物学分子生物学
  • 微生物学 微生物学

背景情况:

  • 非甲酸途径对于许多生物体的异烯酸生物合成至关重要,包括大肠杆菌.
  • 该IspH酶催化了这一途径的关键步骤,将1-基-2-甲基-2-E-丁二酸转化为异丁二酸 (IPP) 和二甲基酸二酸 (DMAPP).

研究的目的:

  • 为了增强来自大肠杆菌的IspH酶的催化活性.
  • 调查铁硫集群和特定的半氨酸残留物在IspH功能中的作用.

主要方法:

  • 在表达ispH.的工程大肠杆菌菌株中,isc操作子 (铁硫集群组件) 的过度表达.
  • 对IspH蛋白进行无氧净化.
  • 用不同度的黄素和黄素减少酶进行酶活性测定.
  • 电子偏磁共振 (EPR) 谱学和光学吸收性用于描述铁硫团的特征.
  • 保存的氨酸残留物的局部导向突变发生.

主要成果:

  • 过度表达iscoperon增加了至少200倍的IspH催化活性.
  • 需要的最大活性为40μM的黄素和12μM的黄素减少酶.
  • EPR和光学吸收证实了IspH蛋白中的 [3Fe-4S](+) 集群.
  • 任何三种保存的氨酸残留物 (在位置12,96和197) 的任何一种突变都大大降低了催化活性 (超过7万倍).

结论:

  • 铁硫集群组装机械显著增强了IspH酶的活性.
  • 由保存的氨酸残留物协调的A [3Fe-4S](+) 集群对于异烯酸生物合成中的IspH催化功能至关重要.