通过ATP-STD NMR光谱检测蛋白质激酶的选
Mark A McCoy1, Mary M Senior, Daniel F Wyss
1Schering-Plough Research Institute, 2015 Galloping Hill Road, Kenilworth, New Jersey 07033, USA. mark.mccoy@spcorp.com
Journal of the American Chemical Society
|June 2, 2005
概括
这项研究引入了ATP-STD NMR,一种使用或探测蛋白质激酶上的ATP结合位点的方法. 它准确地确定了连接体的亲属性,并为药物发现绘制了结合部位的地图.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 结构生物学 结构生物学
- 化学生物学 化学生物学
背景情况:
- 蛋白激酶是关键的药物标,但其ATP结合部位的特征是具有挑战性的.
- 现有的结结合研究方法往往缺乏特异性或容易产生错误阳性.
研究的目的:
- 开发和验证一种新的核磁共振 (NMR) 光谱方法,用于研究蛋白质激酶中的ATP结合位.
- 为了能够精确地确定抑制剂结合亲缘关系和在活性部位内的映射配体相互作用.
主要方法:
- 使用ATP-STD NMR与Mg2+测量ATP-竞争性配体的解离常数 (Ki).
- 采用Mn2+作为一个偏磁探头 (MnATP) 来推断非ATP竞争性联体的近距离.
- 纳入内部标准和对化合物和蛋白质降解控制的参考.
主要成果:
- ATP-STD NMR技术准确地确定了ATP-竞争性配体的广泛的Ki值.
- MnATP 探测器成功推断出非ATP 竞争性配体的接近性.
- 通过使用天然的ATP连接体来实现活性部位的特异性,从而减少了假阳性.
结论:
- ATP-STD NMR是一种多功能和特定的方法,用于表征蛋白质激酶的ATP结合部位的连接物相互作用.
- 这种技术增强了酶向治疗的发现和优化.
- 使用Mg2+和Mn2+探头为全面的结合部位分析提供了补充信息.


