分子克隆和人类FK506结合蛋白FKBP的过度表达
R F Standaert1, A Galat, G L Verdine
1Department of Chemistry, Harvard University, Cambridge, Massachusetts 02138.
Nature
|August 16, 1990
概括
免疫抑制药物FK506与FKBP结合,这是一个基基异构酶. 研究人员对人类FKBP进行了测序,并将其表达为大肠杆菌,发现与Neisseria meningitidis基因有相似之处.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- FK506是一种强大的免疫抑制剂,对于预防器官移植排斥至关重要.
- 像环素A一样,FK506通过调节转录因子来抑制T细胞激活基因转录.
- FK506与FKBP结合,FKBP是一种基-基 cis-trans异构酶,FK506强烈抑制这种异构酶.
研究的目的:
- 为了确定人类FKBP的互补DNA (cDNA) 和氨基酸序列.
- 为了在大肠杆菌中实现有效的活跃,重组的人类FKBP的过度表达.
- 通过将人类FKBP与其他基因组进行比较来研究潜在的进化或功能联系.
主要方法:
- 从Jurkat细胞中分离并对编码人类FKBP的补充DNA (cDNA) 进行测序.
- 在大肠杆菌中复合人类FKBP的克隆和表达,用于过度表达.
- 生物信息分析,将人类FKBP序列与现有的基因组数据库进行比较.
主要成果:
- 成功确定了人类FKBP的cDNA和衍生氨基酸序列.
- 活跃的,重组的人类FKBP在大肠杆菌中高效地过度表达.
- 人类FKBPcDNA序列与Neisseria meningitidis基因组中的开放阅读框架具有显著的相似性.
结论:
- 人类FKBP是免疫抑制剂FK506的关键结合蛋白,已经在序列层面进行了表征.
- 重组人类FKBP的成功过度表达促进了进一步的生化和结构研究.
- 序列相似性表明FKBP在不同的物种,包括细菌中具有保留的功能或进化起源.
