基于细胞的光屏幕用于K +通道和运输器,使用基于细胞外 triazacryptand 的K + 传感器

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 药理学 药理学是指药理学的学科.

背景情况:

• (K+) 通道和输送器是药物的关键目标.
• 之前开发了一种基于 triazacryptand (TAC) 的 K+ 传感器 (TAC-Red),用于体内成像.
• 需要改进的方法来量化跨细胞膜的K + 运输.

研究的目的:

• 为了合成和验证一种新的绿色光细胞外K+传感器,TAC-Limedex.
• 为了证明TAC-Limedex在基于细胞的测试中测量K+流量和运输的实用性.
• 为了适应高通量选的试验.

主要方法:

• 合成TAC-Limedex,这是TAC-bodipy的一种德克斯结合物.
• 对TAC-Limedex光反应对不同K+度,Na+,Cl-和pH的表征.
• 使用TAC-Limedex对HT-29和SiHa细胞的K+流量进行量化.
• 对K+通道和载体的药理学操纵.

主要成果:

• TAC-Limedex在0-2mM K+下显示出50%的光增加,对其他离子和pH无敏.
• 在HT-29细胞中的K+流量在ATP诱导的K+通道激活后增加了8倍,被阻塞剂抑制.
• 电子中性K+/Cl-携带在SiHa细胞中显示,K+流量在假设条件下增加了3倍,被阻塞剂完全抑制.
• 测试适应光板阅读器用于自动选.

结论:

• TAC-Limedex是一种敏感和特定的细胞外K+传感器,用于细胞膜传输研究.
• 基于光的测定有效量化K +流量和传送器活动.
• 这种方法为识别K+运输调节器提供了放射性检测的高通量替代方案.