定量蛋白质组学的SILAC小鼠揭示了kindlin-3作为红细胞功能的一个重要因素
Marcus Krüger1, Markus Moser, Siegfried Ussar
1Department of Proteomics and Signal Transduction, Max-Planck-Institute for Biochemistry, 82152 Martinsried, Germany.
Cell
|July 30, 2008
概括
通过细胞培养中的氨基酸 (SILAC) 进行稳定同位素标记,用于标记四代小鼠. 这种新的SILAC-小鼠方法可以在体内蛋白质功能研究中进行定量蛋白质组比较.
科学领域:
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记 (SILAC) 是基于质谱 (MS) 的定量蛋白质组学的关键技术.
- 在体内应用SILAC是有限的,需要开发新的动物模型进行全面的蛋白质组分析.
研究的目的:
- 开发一种基于SILAC的方法,用于对整个小鼠进行多代代的标签.
- 评估SILAC终身标签对动物发育和生理学的可行性和影响.
- 利用SILAC鼠标模型对淘汰赛小鼠进行定量蛋白质组学分析,以确定蛋白质功能.
主要方法:
- 在四代的老鼠中使用含有天然或13C(6) -lysine的饮食进行标记.
- 质谱法 (MS) 用于确定血液细胞和器官中的蛋白质整合率.
- 在各种缺少特定蛋白质 (例如β1整合素,β-帕文,Kindlin-3) 的淘汰赛小鼠的各种器官上进行了SILAC分析.
主要成果:
- 通过F2代来实现对小鼠的完整标签,对发育,生长或行为没有不良影响.
- 多发性硬化症的分析证实了不同组织的高蛋白质整合率.
- 对淘汰赛小鼠的SILAC分析证实了蛋白质的缺失,并揭示了Kindlin-3缺乏红细胞红细胞膜骨架中的结构缺陷.
结论:
- SILAC-小鼠方法是实体内定量蛋白质组学研究的强大而多功能工具.
- 这种方法允许在复杂的生物系统中对蛋白质和通路进行功能性表征.
- SILAC鼠标模型为研究遗传疾病和确定治疗点提供了新的途径.
