直接选择位点的共价蛋白固定,由酸乙烯转移酶催化
Lu Shin Wong1, Jenny Thirlway, Jason Micklefield
1School of Chemistry and Manchester Interdisciplinary Biocentre, The University of Manchester, 131 Princess Street, Manchester M1 7DN, United Kingdom.
Journal of the American Chemical Society
|August 30, 2008
概括
研究人员开发了一种新的方法,使用Sfp酶和ybbR标签将蛋白质固定在表面上. 这种技术可以实现稳定,特定于位点的共价附着,保留生物传感器和微阵列等应用中的蛋白质功能.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 材料科学 材料科学 材料科学
- 化学工程是化学工程的重要组成部分.
背景情况:
- 蛋白质固定对于诸如蛋白质微阵列,生物传感器和生物催化等应用至关重要.
- 开发稳定,功能和同质的固定蛋白质需要高效和特定站点的共价固定方法.
研究的目的:
- 采用酸乙烯转移酶Sfp来催化重组蛋白质在固体支上的直接,特定位点的共价固定.
- 为了证明这种方法在不同蛋白质和表面的多功能性.
主要方法:
- 利用Sfp酶催化ybbR标记的重组蛋白质与CoA功能化的表面的结合.
- 采用质谱法来确认蛋白质和支物之间形成共价键.
- 在PEGA树脂珠和水凝微阵列幻灯片上测试了固定.
主要成果:
- Sfp成功催化了一种模型乙载体蛋白 (ACP) 的特定位点的共价固定在CoA衍生PEGA树脂珠上.
- 路西法酶 (Luc) 和谷氨-S转移酶 (GST) ybbR融合蛋白被固定,具有高保留的酶活性.
- 这种方法对各种ybbR融合蛋白 (ACP,Luc,GST,thioredoxin) 在珠子和水凝幻灯片上都有效.
- 直接从细胞溶解物混合物中成功固定被证明.
结论:
- Sfp催化表面结合是一种温和,定量和快速的蛋白质固定方法.
- 这种单步过程不需要先前对目标蛋白进行化学修饰.
- 该策略提供了一个多功能平台,用于为各种应用程序创建功能性蛋白质基材料.
