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通过在酵母中进行遗传选择来确定NGFI-B的DNA结合部位
T E Wilson1, T J Fahrner, M Johnston
1Department of Pathology, Washington University School of Medicine, St. Louis, MO 63110.
Science (New York, N.Y.)
|May 31, 1991
概括
一个新的酵母系统可以识别像NGFI-B.这样的蛋白质的DNA结合点. 这种方法发现了NGFI-B反应元件 (NBRE),对于理解这种激素受体超级家族成员的基因调节至关重要.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 结合DNA的蛋白质在基因调节中起着至关重要的作用.
- 识别特定的DNA结合部位对于理解蛋白质功能至关重要.
- NGFI-B蛋白是类固醇甲状腺激素受体超级家族的成员,其DNA结合特异性基本未知.
研究的目的:
- 开发和验证一种体内选择系统,用于识别DNA结合蛋白标.
- 为了确定NGFI-B蛋白的特定DNA结合部位.
- 描述NGFI-B结合部位的功能性质及其与蛋白质的相互作用.
主要方法:
- 开发一种体内酵母选系统.
- 使用已知的DNA结合蛋白GCN4验证系统.
- 隔离含有NGFI-B结合部位的老鼠基因组DNA片段,使用化学激活剂.
- 在哺乳动物细胞中进行共传染实验,以评估转录激活.
主要成果:
- 成功开发并验证了DNA结合部位的体内选择系统.
- 确定了NGFI-B蛋白的特定DNA结合部位,称为NGFI-B反应元件 (NBRE).
- 在功能上,NBRE与其他相关核受体的结合元件不同.
- 在哺乳动物细胞中,NGFI-B激活了从NBRE转录的作用,不论其结合链域是什么.
结论:
- 开发的酵母选择系统有效地识别了新型蛋白质的DNA结合部位.
- 已经确定并描述了NGFI-B响应元件 (NBRE).
- NGFI-B可以通过NBRE调节转录,突出其在基因表达中的作用.
- 仅仅DNA结合域就足以使NGFI-B结合DNA并激活转录.