动态铜 (I) 用基因编码的光铜 (I) 传感器对哺乳动物细胞进行成像
Seraphine V Wegner1, Hasan Arslan, Murat Sunbul
1Department of Chemistry and Institute for Biophysical Dynamics, The University of Chicago, 929 East 57th Street, Chicago, Illinois 60637, USA.
Journal of the American Chemical Society
|February 6, 2010
概括
研究人员开发了一种新的光传感器Amt1-FRET,以可视化细胞铜的可用性. 这个工具准确地测量了低铜水平,这对于了解细胞过程和毒性至关重要.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 分子成像学分子成像学
背景情况:
- 铜对生命至关重要,但在高度下有毒,需要严格的细胞控制.
- 由于其紧密的结合环境,可视化细胞内铜的可用性具有挑战性.
研究的目的:
- 开发一种基因编码的光传感器,用于可视化细胞铜的可用性.
- 在不同类型的细胞中描述传感器的灵敏度,选择性和动态范围.
主要方法:
- 设计了一个光传感器 (Amt1-FRET) 基于对铜反应的转录调节器Amt1.
- 使用Förster共振能量转移 (FRET) 来检测铜 (I) 诱导的形状变化.
- 在酵母和哺乳动物细胞中评估传感器性能.
主要成果:
- Amt1-FRET是一个比度传感器,对铜的亲和力非常高 (I) (K) (d) =2.5 x 10 (-18) M).
- 传感器证实了酵母中铜的可用性非常低,反映了细胞铜的上限.
- Amt1-FRET在哺乳动物细胞的细胞铜缓冲区内运行,在几分钟内报告动态铜波动.
结论:
- Amt1-FRET提供了一种敏感和选择性的方法来可视化细胞内铜的可用性.
- 该传感器对于研究各种生物系统中的铜恒温和动态非常有价值.
- 这个工具有助于理解细胞中铜水平的严格控制.
