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关键残留物涉及EGF类似领域的结合基因

P A Handford¹, M Mayhew, M Baron

¹Sir William Dunn School of Pathology, University of Oxford, UK.

|May 9, 1991

概括

这项研究确定了表皮生长因子 (EGF) 类域中的关键氨基酸,这些区域对于结合至关重要,影响凝血因子和潜在的其他细胞外蛋白质. 这些残留物中的突变显著损害结合,对诸如血友病B等疾病有影响.

科学领域:

生物化学生物化学
分子生物学分子生物学
蛋白质工程是指蛋白质工程.

背景情况:

细胞外蛋白通常具有类似于表皮生长因子 (EGF) 的域.
这些域含有保留的残留物 (Asp/Asn,Asp/Asn,Asp*/Asn*,Tyr/Phe) 涉及到功能.
第一个类似于EGF的凝血因子IX和X的域绑定,对它们的活性至关重要.

研究的目的:

调查个人共识残留物在EGF类似域结合中的作用.
描述特定突变对亲和力的影响.
探索缺陷结合的潜在补偿机制.

主要方法:

人体因子IX的蛋白质工程 EGF类似的领域.
1H-NMR光谱法用于测量依赖的变化.
位点定向的突变发生改变特定的氨基酸残留物.

主要成果:

证实Asp 47,Asp 49和Asp 64直接参与结合.
以前被忽视的 Gln 50 也在协调中起作用.
突变Asp 47到Glu和Asp 64到Asn大大降低了结合亲和力 (分别是4倍和1000倍).
一个补偿突变 (Gln 50到Glu) 在单独引入时部分挽救了缺陷的结合,并增强了亲和力.

结论:

在类似于EGF的领域内确定了一个新的结合部位.
证明了特定的阿斯巴达酸盐和谷氨酸残留物对结合的关键重要性.
提供了各种细胞外蛋白质中结合基因的证据,包括像Notch.这样的发育蛋白质.
强调了针对凝血障碍中的结合缺陷的治疗策略的潜力.

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