可点击的NAD类似物用于标记poly ((ADP-ribose) 聚合酶的基底蛋白
Hong Jiang1, Jun Hyun Kim, Kristine M Frizzell
1Department of Chemistry and Chemical Biology, Cornell University, Ithaca, New York 14850, USA.
Journal of the American Chemical Society
|June 22, 2010
概括
研究人员开发了可点击的尼古丁胺胺氨基二核酸 (NAD) 类似物,以识别由Poly(ADP-ribose) 聚合酶 (PARP) 修饰的蛋白质. 这种方法成功标记和识别了79个潜在的PARP-1基质,进步了对细胞过程中PARP功能的理解.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 聚ADP-ribose) 聚合酶 (PARP) 是关键的酶,参与DNA修复,转录和分裂.
- 识别PARP基底蛋白对于阐明它们的分子功能至关重要.
- 现有的基质识别方法存在局限性.
研究的目的:
- 开发和验证用于标记PARP基质的可点击尼古丁胺胺氨基二核酸 (NAD) 类型的新型类似物.
- 为了识别PARP-1和Tankyrase-1的新型基底蛋白.
- 为了更好地理解PARP介导的翻译后修改.
主要方法:
- 合成可点击的NAD类似物,具有终端基基团.
- 用光或生物素亲和度标签标记PARP基质.
- 通过SDS-PAGE进行可视化,并使用亲和力净化和质谱学进行识别.
主要成果:
- 使用光标签成功标记了PARP-1和Tankyrase-1基质.
- 鉴定出79种潜在的PARP-1基质,包括已知的位基因,如质子和hNRNP.
- 已确认蛋白和线粒体蛋白 (TRAP1,酸盐合成酶,GDH) 作为体外PARP-1基质.
结论:
- 可点击的NAD类似物是标记,检测,隔离和识别PARP基质的有效工具.
- 这种方法方便对PARP活性进行全面的蛋白质组学研究.
- 这些发现有助于更深入地了解PARP的多样化生物作用.
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