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通过共振能量转移测试逆转录病毒蛋白酶的新型化基质
E D Matayoshi1, G T Wang, G A Krafft
1Pharmaceutical Discovery Division, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL 60064.
Science (New York, N.Y.)
|February 23, 1990
概括
开发了一种新的光共振能量转移 (RET) 试验,以测量人类免疫缺陷病毒1蛋白酶 (HIV-1 PR) 活性. 这种试验可以通过监测病毒多蛋白质处理来快速识别新的艾滋病治疗药物.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 药物发现 药物发现 药物发现
背景情况:
- 来自人体免疫缺陷病毒1 (HIV-1) 的11kD蛋白酶 (PR) 对病毒成熟至关重要,也是获得性免疫缺陷综合征 (AIDS) 治疗的关键标.
- 现有的研究HIV-1 PR活性的方法,如HPLC和电泳,耗时且对运动分析不那么精确.
研究的目的:
- 开发一种使用分子内光共振能量转移 (RET) 检测HIV-1PR活性的新型连续检测方法.
- 为了促进发现新的HIV-1PR抑制剂,并使详细的酶学研究.
主要方法:
- 合成了一种来自自然HIV-1 PR处理场所的灭化基质 (DABCYL-Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln-EDANS).
- 该试验测量了由HIV-1 PR.导致基质的特定裂变而导致的光强度的时间依赖性增加.
- 类似的基质被设计用于相关的鸟类骨髓母细胞瘤病毒 (AMV) 蛋白酶.
主要成果:
- RET试验表明,基质在Tyr-Pro键处受到HIV-1 PR的特定裂变,导致光线的线性增加.
- 该试验显示,对于HIV-1 PR. 分裂的基质每mol的光量子产量增加了40.0倍.
- 观察到AMV PR基底的光量子产量增加了34.4倍.
结论:
- 开发的基于RET的测定方法是简单,快速和精确的,用于确定复原病毒蛋白酶的反应速率.
- 这种方法在传统的HPLC和电泳分析中为HIV-1 PR活动的确定提供了显著的优势.
- 该试验对运动分析,抑制剂查和病毒蛋白酶的详细酶学有价值.