一系列高化基质的合成和表征用于谷氨转移酶,这是一个一般的战略
Jie Zhang1, Aya Shibata, Mika Ito
1Institute of Environmental Medicine, Division of Biochemical Toxicology, Karolinska Institutet, Stockholm, Sweden.
Journal of the American Chemical Society
|July 27, 2011
概括
研究人员开发了新的光探针,用于敏感检测谷氨转移酶 (GSTs). 这些新型基板能够对生物样本中的GST活动进行高度敏感的量化和成像,从而推进诊断和研究工具.
科学领域:
- 生物化学和分子生物学
- 酶检测和生物技术
背景情况:
- 谷氨转移酶 (GSTs) 是重要的酶,在生物技术中具有应用,并在瘤生物学中具有相关性.
- 由于其在某些癌症中的净化和过度表达中的作用,需要对GSTs进行敏感的检测方法.
研究的目的:
- 开发和描述新型化基质,用于敏感检测谷氨转移酶 (GST) 活性.
- 建立一个通用和多功能策略,用于创建特定酶的光探针.
主要方法:
- 通过将光分子 (氨酸,紫色,罗达胺) 与2,4-丁二硫胺 (DNs) 结合,合成新型化基质.
- 用各种GST酶对基质性能进行表征,测量光度增加,动力参数 (kcat/Km) 和速率增强.
- 基板的应用用于细胞提取物中的GST活性量化和微小GST1 (MGST1) 活动的活细胞成像.
主要成果:
- 合成的DN衍生物库马林,紫色和罗达胺的初始光度较低.
- GST催化裂变释放了自由光体,导致显著的光度增加 (71-1200倍) 和高的催化效率 (kcat/Km值为10^4-10^7 M^-1s^-1).
- 基质显示出高速率增强 (106-109倍),并成功地用于敏感的GST活动量化和活细胞成像,固定后保留光.
结论:
- 成功建立了一种用于产生化GST基质的多功能战略.
- 新型基板为GST检测提供高度敏感的测试,其中一些是迄今为止报告的最敏感的.
- 这些探测器是用于量化生物样本中的GST活动和用于细胞成像应用的宝贵工具.
