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寄生虫原生动物中的基因替代.
1Department of Biological Chemistry and Molecular Pharmacology, Harvard Medical School, Boston, Massachusetts 02115.
Nature
|November 8, 1990
概括
在Leishmania major中,同源基因向使功能基因研究成为可能. 这种方法有效地取代了寄生虫基因,有助于研究类原生虫引起的疾病.
科学领域:
- 寄生虫学的寄生虫学
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
背景情况:
- 特里帕诺索马提德原生虫导致人类重大疾病.
- 识别分子在其传染周期中的功能是具有挑战性的.
- 基因功能验证对于理解这些病原体至关重要.
研究的目的:
- 建立在Leishmania主要的同源基因向作为功能基因组学的方法.
- 为了测试对基因破坏同源重组的效率.
- 为化学疗法研究创建缺少二叶酸还原酶-甲基酸合成酶 (DHFR-TS) 的Leishmania主要线条.
主要方法:
- 开发一种基因向构造,使用二叶酸减少酶-二胺酸合成酶 (dhfr-ts) 侧翼序列.
- 莱什马尼亚大与构造物的感染.
- 使用neomycin phosphotransferase进行重组寄生虫的选择.
- 产生异构的删除线,并随后替换剩余的dhr-ts副本.
主要成果:
- 同源基因替代发生在45%的殖民地,增加到近100%的低DNA数量.
- 在Leishmania的整合性转染表明同源重组的高频率,类似于酵母.
- 在功能上缺少DHFR-TS的Leishmania主要线条被成功生成.
结论:
- 同源基因向是莱什马尼亚功能基因组学的一个强大而有效的工具.
- 这种方法有助于研究trypanosomatids中的基本基因和药物标.
- 同源重组的高频率允许几乎任何寄生虫基因的完全替换.