使用质谱测量检测ubiquitin-binding域的亲和力和ubiquitin链接选择性
Kleitos Sokratous1, Lucy V Roach, Debora Channing
1School of Chemistry, University of Nottingham, University Park NG7 2RD, UK.
Journal of the American Chemical Society
|March 21, 2012
概括
我们开发了一种质谱法,用于研究与UB-binding域 (UBDs) 的ubiquitin (Ub) 相互作用. 这项技术揭示了如何识别不同的泛素链接,为细胞信号通路提供了新的见解.
科学领域:
- 生物化学 生化学
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 在Ubiquitin (Ub) 和Ub-binding域 (UBDs) 之间的非共价相互作用对于Ub介导的信号传导至关重要.
- 通过异酸键组装到各种拓的多比基因 (多-Ub) 链,调节各种细胞过程.
研究的目的:
- 开发和应用一种快速和灵敏的电喷射电离-质谱法 (ESI-MS) 方法来确定聚-Ub·UBD相互作用的异联结选择性和亲和力.
- 调查各种UBD的结合特性,包括那些与神经退行性疾病和癌症有关的人.
主要方法:
- 开发和应用一种新的ESI-MS技术,用UBD分析单基和多基复合物.
- 涉及α-螺旋和指 (ZnF) UBDs的相互作用的表征.
主要成果:
- 该ESI-MS方法准确地确定了与其他生物物理技术相比的亲和度 (2-200μM范围).
- 证实了hHR23A-UBA2域的Lys48结合的多-Ub信号作用.
- 对于异酸酶-T ZnF UBP 域和 Rabex-5 MIU 没有发现联系特异性.
- 发现循环Lys48二-ubiquitin与非循环形式相似的亲缘关系结合,这表明它可能在Ub信号传递中发挥作用.
- 检测到三元复合体,表明多站点相互作用和UB信号通路之间的潜在交叉声.
结论:
- 开发的ESI-MS方法是分析Ub-UBD交互和链接特异性的强大工具.
- 这些发现为Ub介导信号传递的机制提供了新的见解,包括循环ubiquitin的潜在作用.
- 这项研究为研究多个Ub信号通路的复杂相互作用开辟了道路.
