在实验室中选择功能性兰蒂

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 合成生物学 合成生物学

背景情况:

• 兰蒂是通过体合成的,其特征是存在兰因交叉链.
• 因其结构复杂性和多样性,鉴定具有特定生物活动的功能性兰氏具有挑战性.
• 排序酶A是黄金葡萄球菌的病变发生的关键转胺酶,使其成为一个有吸引力的治疗点.

研究的目的:

• 开发一种高通量方法,用于生成和识别功能性人造兰.
• 通过隔离对Sortase A.的新型结合剂来验证这种方法的实用性.
• 为了研究与Sortase A.的lantipeptide相互作用的结构要求.

主要方法:

• 利用体外翻译与无酶的后翻译修改协议相结合,生成一个多样化的1011个以上的人工兰蒂的图书馆.
• 使用mRNA-lantipeptide显示器用于lantipeptide库的高通量选.
• 生物化学试验被用来描述分离的兰和Sortase A.之间的相互作用.

主要成果:

• 成功生成了大量含有兰胺的庞大库,具有前所未有的多样性.
• 确定了特定的兰氏结体,它们对Sortase A.具有很高的亲和力.
• 证明结合相互作用严重依赖于 (2S,6R) - 兰西因残留物的存在和Sortase A.的活性构造.

结论:

• 开发的mRNA-lantipeptide显示方法有效地发现了来自各种图书馆的功能性.
• 这种方法为识别新型抑制剂或Sortase A.等酶调节剂提供了强大的工具.
• 了解结构-活性关系对于设计针对细菌感染的强效兰基疗法至关重要.