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捕获DNA的电泳过程
L Ulanovsky1, G Drouin, W Gilbert
1Department of Cellular and Developmental Biology, Harvard University, Cambridge, Massachusetts 02138.
Nature
|January 11, 1990
概括
将斯特雷普塔维丁连接到单链DNA上显著改善了聚烯胺凝中的DNA大小分离. 这种蛋白质修饰通过改变DNA流动性,提高了场逆转凝电泳 (FIGE) 中的带分辨率.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
- 生物物理学的生物物理.
背景情况:
- 场逆转凝电泳 (FIGE) 用于DNA大小分离.
- 以前使用FIGE改进单链DNA分离的尝试取得了有限的成功.
研究的目的:
- 研究将一个中性球状蛋白 (斯特雷普塔维丁) 连接到单链DNA对其电泳流动性的影响.
- 为了增强聚烯胺凝中的DNA带分离和分辨率.
主要方法:
- 单链DNA的修改,通过将斯特雷普塔维丁连接到一个端.
- 在恒定电场和电场逆转条件下,在聚烯胺凝中进行电泳.
- 分析不同电压和脉冲时间的DNA移动性模式,值和切断尺寸.
主要成果:
- 斯特雷普塔维丁的附着物极大地改变了DNA的移动性,增加了带分离组.
- 在恒定场中,修改后的DNA表现出尺寸依赖的延迟,值和切断尺寸在更高的电压下下降.
- 在FIGE中,更长的反向脉冲允许更大的修饰DNA碎片进入凝.
结论:
- 蛋白质-DNA相互作用,特别是凝矩阵捕获附着的链条维丁,决定了DNA的移动性.
- 被困的蛋白质-DNA复合物的释放概率取决于电场强度和热运动.
- 这种方法为单链DNA的增强大小分离提供了一种新的方法.