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在Leishmania enriettii中的细菌neor基因的稳定表达
A Laban1, J F Tobin, M A Curotto de Lafaille
1Department of Tropical Public Health, Harvard School of Public Health, Boston, Massachusetts 02115.
Nature
|February 8, 1990
概括
在Leishmania enriettii中使用一种新菌素耐药基因实现了稳定的基因表达. 这一突破使得可以对寄生虫原生动物中的RNA转剪序列进行功能分析.
科学领域:
- 分子寄生虫学 分子寄生虫学
- 基因工程是一种基因工程.
- 在RNA生物学,RNA生物学.
背景情况:
- 由于有限的基因引入和表达方法,对寄生虫原生动物的基因操纵具有挑战性.
- 以前的研究表明,在这些生物体中,使用细菌甲转移酶 (CAT) 进行过渡性基因表达.
- 寄生原生动物,如Leishmania enriettii,表现出独特的RNA转接合机制.
研究的目的:
- 在Leishmania enriettii中建立稳定的基因表达.
- 为了研究RNA转剪接在trypanosomatids中必不可少的序列.
- 开发用于寄生原生动物功能遗传分析的工具.
主要方法:
- 构建了一个嵌合基因,其中包含一个耐尼奥米辛 (neor) 基因,并配有α-tubulin 基因间序列.
- 在Leishmania enriettii细胞中引入了这种结构.
- 针对具有稳定基因表达的耐药寄生虫进行选择.
主要成果:
- 在耐药Leishmania enriettii中实现了neomycin抗药基因的稳定表达.
- 证实了在信使RNA中与neor基因合并的拼接领导序列的存在.
- 在耐药细胞中观察到neor mRNA和异染色体等离子体DNA的多化.
结论:
- 开发了一种在Leishmania enriettii中稳定基因表达和选择的方法.
- 证明了这个系统用于分析涉及RNA转接的序列的实用性.
- 开辟了对类寄生虫的功能遗传研究的途径.