在二叶酸还原酶中,有两种烯氨形成了一个催化剂,使得蛋白质动态的研究成为可能
Shengxi Chen1, Lin Wang, Nour Eddine Fahmi
1Center for BioEnergetics, Biodesign Institute, and Department of Chemistry and Biochemistry, Arizona State University, Tempe, Arizona 85287, USA.
Journal of the American Chemical Society
|November 3, 2012
概括
研究人员用基组对二叶酸还原酶 (DHFR) 进行了工程设计,以观察脱酶的形成,揭示了与酶反应期间产品释放相关的蛋白质构造变化.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 酶学 是一种酶学.
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
背景情况:
- 光共振能量转移 (FRET) 配对对酶的小距离变化缺乏灵敏度.
- 二叶酸减少酶 (DHFR) 的尺寸限制了传统FRET方法的实用性.
研究的目的:
- 开发一种更灵敏的方法来观察酶的结构变化.
- 为了研究DHFR中的蛋白质动态,使用pyrene excimer形成.
主要方法:
- 通过在体外表达系统的使用,在位置16和49引入两个烯部分来改造DHFR.
- 使用了pyren-1-ylalanyl-tRNA (CUA) 来进行特定地点的pyrene的结合.
- 在单个和多个周转条件下观察到在修改后的DHFR中排卵细胞形成 (λ(ex) 342 nm; λ(em) 481 nm).
主要成果:
- 成功生成了一种能够形成排卵细胞的修饰DHFR.
- 修改后的DHFR保留了其催化活性.
- 观察到与转移后的蛋白质构造变化相关的排外体形成.
结论:
- 二烯排外体形成为DHFR形态动力学提供了敏感的读数.
- 观察到的构造变化很可能与酶的催化循环有关,特别是产品解离.


