活昆虫细胞中的蛋白质的高分辨率异质核多维NMR,使用baculovirus蛋白质表达系统
Jumpei Hamatsu1, Daniel O'Donovan, Takashi Tanaka
1Department of Chemistry, Graduate School of Science and Engineering, Tokyo Metropolitan University, 1-1 Minami-Osawa, Hachioji-shi, Tokyo 192-0373, Japan.
Journal of the American Chemical Society
|January 19, 2013
概括
这项研究引入了一种新的细胞内核磁共振 (NMR) 方法,使用sf9细胞进行详细的蛋白质分析. 这种方法可以在活细胞内进行高分辨率光谱和蛋白质结构研究.
科学领域:
- 生物物理学的生物物理.
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生化学
背景情况:
- 细胞内核磁共振 (NMR) 能够在活的真核细胞中进行蛋白质研究.
- 现有的协议在范围和应用上有局限性.
- sf9细胞/细菌病毒系统为新的细胞内NMR研究提供了一个潜在的平台.
研究的目的:
- 通过使用sf9细胞/baculovirus系统引入一种新的细胞内NMR方法.
- 扩大细胞内NMR的功能和应用.
- 为了证明从sf9细胞表达的蛋白质中获得高分辨率的NMR光谱的可行性.
主要方法:
- 在sf9昆虫细胞中表达模型蛋白.
- 获得2D (1H-15N) 相关性和3D三重共振NMR光谱.
- 在数据处理中应用非线性采样和定量最大算法.
- 从初始分配NMR共振和NOE交叉峰的识别.
主要成果:
- 为四种模型蛋白质获得了高分辨率的2D (1H-15N) 相关性光谱.
- 在sf9细胞中成功获得了Streptococcus蛋白G B1域的3D三重共振NMR光谱.
- 大约80%的预期的骨干NMR共振被分配.
- 在3D (15N) 分离的NOESY光谱中确定了分辨率良好的NOE交叉峰.
结论:
- 开发的sf9细胞/baculovirus系统对于细胞内NMR研究是有效的.
- 高分辨率的蛋白质光谱和结构信息可以从 sf9 细胞内的蛋白质中获得.
- 这种新的方法显著扩大了细胞内NMR的实用性,用于研究细胞环境中的蛋白质结构和动态.
