通过CRISPR/Cas介导基因组工程,携带多个基因突变的小鼠的一步生成
Haoyi Wang1, Hui Yang, Chikdu S Shivalila
1Whitehead Institute for Biomedical Research, Cambridge, MA 02142, USA.
Cell
|May 7, 2013
概括
克里斯普尔/卡斯基因编辑系统能够同时破坏小鼠中的多个基因,大大加快了基因功能和相互作用的研究.
科学领域:
- 遗传学 是一个遗传学.
- 分子生物学分子生物学
- 生物工程是生物工程.
背景情况:
- 产生具有多个突变的转基因小鼠传统上是一个缓慢的,多步骤的过程.
- 克里斯普尔/卡斯系统为精确的基因组编辑提供了一个强大的工具.
研究的目的:
- 为了证明CRISPR/Cas系统在小鼠胚胎干细胞和胚芽细胞中进行多重基因编辑的能力.
- 建立一个单步方法来产生多变异小鼠.
主要方法:
- 在小鼠ES细胞中,五个基因 (Tet1,2,3,Sry,Uty) 的CRISPR/Cas介导的同时破坏.
- 针对Tet1和Tet2的Cas9mRNA和sgRNA的同时注射到囊胞中.
- 在两个基因中同时发生点突变的Cas9mRNA/sgRNAs与突变寡基因的联合注射.
主要成果:
- 在ES细胞中同时破坏五个基因时获得的高效率.
- 在产生具有Tet1和Tet2.2双基突变的小鼠中80%的效率.
- 在两个目标基因同时成功生成精确的点突变.
结论:
- 克里斯普尔/卡斯系统提供了一种快速高效的单步方法,用于生成多变异小鼠.
- 这项技术将加速基因功能,冗余性和表观性疾病的体内研究.
