半合成莱克-4-二甲基亚胺胺联体用于标记和对活细胞表面的葡萄糖蛋白进行分析
Takahiro Hayashi1, Yedi Sun, Tomonori Tamura
1Department of Synthetic Chemistry and Biological Chemistry, Graduate School of Engineering, Kyoto University, Katsura, Kyoto 615-8510, Japan.
Journal of the American Chemical Society
|July 30, 2013
概括
研究人员开发了新的半合成反应性莱克来选择性地标记和分析细胞表面糖蛋白. 这种新工具可以准确地识别活细胞上的甘氨酸蛋白,包括像EGFR这样的低丰富的甘氨酸蛋白.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 化学生物学 化学生物学
背景情况:
- 细胞表面葡萄糖蛋白对于细胞信号和免疫反应等生物功能至关重要.
- 甘氨酸的结构多样性在选择性糖蛋白标记和成像方面带来了挑战.
- 目前用于糖蛋白分析的现有方法在范围和适用于生物系统方面是有限的.
研究的目的:
- 设计和制造用于选择性糖蛋白标签的新型半合成反应性莱克.
- 为了证明这些莱克对活细胞上葡萄糖蛋白的概况的有用性.
- 使用先进的蛋白质组技术识别特定的甘氨酸蛋白,包括低丰富的甘氨酸蛋白.
主要方法:
- 使用亲和导向和点击化学方法,与4-二甲基亚胺胺 (DMAP) 结合莱克 (Congerin II,小麦胚芽聚合素).
- 在体外和活细胞上选择性糖蛋白标签的DMAP绑定的乳催化剂的应用.
- 使用2D-PAGE进行糖蛋白分离和免疫沉,并与质谱 (MS) 进行鉴定.
主要成果:
- 与DMAP结合的莱克成功地实现了活细胞上糖蛋白的选择性标记.
- 2D-PAGE使得从不同的细胞系中分离出独特暴露的葡萄糖蛋白.
- 通过MS指纹识别,在HeLa细胞上鉴定出48种内源性葡萄糖蛋白,包括低丰富的EGFR和神经平素-1.
结论:
- 半合成的DMAP结合的莱克代表了用于糖蛋白分析的强大新工具.
- 这种方法使复杂的生物系统中细胞表面糖蛋白的准确标记和分析更加容易.
- 该方法增强了在活细胞上丰富和低丰富的葡萄糖蛋白的识别.
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