用于生物催化物的生物分析:多重毛细管电泳-质谱测定用于氨基转移酶基质的发现和特异性分析
Gleb G Mironov1, Antony D St-Jacques, Alexander Mungham
1Department of Chemistry and ‡Centre for Catalysis Research and Innovation, University of Ottawa , Ottawa, Ontario, Canada , K1N 6N5.
Journal of the American Chemical Society
|August 23, 2013
概括
我们开发了MINISEP-MS,一种使用毛细血管电泳和质谱的自动化酶测定. 该方法使用最小的试剂快速分析酶基质特异性和动力学,有助于发现新型生物催化剂.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
- 酶学 是一种酶学.
背景情况:
- 酶表征对于生物催化剂至关重要.
- 需要高通量方法来发现酶.
- 现有的测定方法可能是耗时和试剂密集的.
研究的目的:
- 为了引入MINISEP-MS,一个自动化的酶测定.
- 为了证明其在分析酶基质特异性的有用性.
- 测量酶动力学,用于酶工程和发现.
主要方法:
- 开发了MINISEP-MS:毛细管电泳与电喷离子质谱相结合.
- 使用毛细血管作为微反应器,用于同时进行多基板测试.
- 对三种氨基转移酶进行了测试,测试了33种氨基酸基质.
主要成果:
- 成功地回顾了已知测试的氨基转移酶的基质特异性.
- 发现了这些酶的新型氨基酸基质.
- 测量了氨基酸供体基质的明显K (M) 和k (cat) 动力参数.
结论:
- MINISEP-MS是一种多功能,自动化工具,用于快速生成酶概况.
- 该试验能够有效地发现酶基质特异性.
- MINISEP-MS促进了生物催化剂酶的识别和工程.


