增强亮度的DNAFIT探针用于在组织中进行无冲洗RNA成像
Felix Hövelmann1, Imre Gaspar, Anne Ephrussi
1Institut für Chemie der Humboldt-Universität zu Berlin , 12489 Berlin, Germany.
Journal of the American Chemical Society
|December 4, 2013
概括
研究人员开发了用于RNA成像的明亮和响应敏捷的杂交探头. 这些新型探头,称为强制间隔 (FIT) 探头,可以在没有复杂程序的情况下直接对组织中的RNA进行光显微镜.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物物理学的生物物理.
- 显微镜的使用方法
背景情况:
- 原性寡核酸对于细胞和组织RNA成像至关重要.
- 高光响应和亮度对于检测RNA与背景自光相对应是必不可少的,特别是当探针洗是不可行的时.
- 现有的光灭探头提高了响应能力,但往往缺乏足够的亮度.
研究的目的:
- 开发新的杂交探测器,将高光响应度与RNA成像的增强信号亮度相结合起来.
- 为了克服先前开发的多种染料探针中自灭的局限性.
- 在复杂的生物样本 (如组织) 中实现直接,高效的RNA成像.
主要方法:
- 开发使用 thiazole orange (TO) 染料作为核基替代品的无灭器 DNA 强制间隔 (FIT) 探针.
- 将响应的TO核酸盐与发射性氧化胺类类似物JO结合起来,以增强亮度.
- 探测器性能的表征,包括光响应 (F/F0) 和摩尔灭绝系数.
主要成果:
- 单链TO/JO FIT探头呈现最小的光,而对目标RNA的杂交防止火,导致明亮的发射.
- TO核酸作为光采集器,增强灭绝系数,并将能量转移到JO发射器,从而产生43mLmol-1cm-1的亮度.
- 在复杂组织中成功地使用TO/JO FIT探针在广场激发下对奥斯卡mRNA进行直接光显微镜成像.
结论:
- TO/JO FIT探头通过提供高响应性和异常亮度,在RNA成像方面取得了重大进展.
- 这种方法允许在组织中快速,直接的RNA成像,而不需要广泛的洗步骤或专门的放大技术.
- 开发的探测器有助于先进的RNA可视化,使复杂的成像可以使用标准的显微镜设备.
