具有单面特异性的聚合酶链反应:对T细胞受体三角链的分析
E Y Loh1, J F Elliott, S Cwirla
1Departments of Medicine and Microbiology and Immunology, Stanford University School of Medicine, CA 94305-5402.
Science (New York, N.Y.)
|January 13, 1989
概括
定PCR (A-PCR) 能够在不了解5'序列的情况下进行基因放大,与传统PCR不同. 这种方法确定了来自外围血液玛三角形T细胞的人类T细胞受体三角链mRNA中的新型V delta 3基因段.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
背景情况:
- 标准的聚合酶连锁反应 (PCR) 需要在目标两端的已知序列进行放大.
- 这种限制阻碍了对编码T细胞受体 (TCR) 或免疫球蛋白等分子的基因的分析,其中5'序列通常是未知的.
- 为了克服这一局限性,开发了一种新的方法,即定PCR (A-PCR).
研究的目的:
- 介绍和证明定聚合酶链反应 (A-PCR) 的实用性.
- 分析来自人体外周血液中的 gamma delta T 细胞的 T 细胞受体 (TCR) 三角链信使RNA (mRNA).
- 为了识别新的基因段,并在TCR三角链内表征结节序列.
主要方法:
- 定聚合酶链反应 (A-PCR) 的发展,该反应只需要在目标片段的3'端进行序列特异性.
- 应用A-PCR来分析来自人体外周血液玛三角T细胞的TCR三角链mRNA.
- 对放大TCR三角链片段进行测序和分析,以确定基因段和结节序列.
主要成果:
- 一个以前未被描述的V delta基因段,被指定为V delta 3,在大多数分析的马三角形T细胞中被确定.
- 这些细胞的三角链连接序列形成了一个独特的亚群.
- 当5'序列未知时,A-PCR证明有效地放大和分析TCR三角链mRNA.
结论:
- 定PCR (A-PCR) 是放大未知序列的宝贵工具,特别是在免疫系统基因分析的背景下.
- 鉴定V delta 3表明T细胞受体谱中存在比以前更大的多样性.
- 在马三角型T细胞中交叉序列分析揭示了特定的模式和亚群.
