设计ADP-ribosyltransferases的基质特异性,以识别直接的蛋白质标
Ian Carter-O'Connell1, Haihong Jin, Rory K Morgan
1Program in Chemical Biology and Department of Physiology and Pharmacology, and †Department of Biochemistry, Oregon Health & Science University , Portland, Oregon 97210, United States.
Journal of the American Chemical Society
|March 20, 2014
概括
研究人员开发了工程化腺二酸盐核糖转移酶 (ARTDs),以识别直接的蛋白质标. 这种新方法成功地确定了42个ARTD1和301个ARTD2点,推进了细胞反应研究.
科学领域:
- 生物化学和分子生物学
- 酶学 是一种酶学.
- 细胞信号传输 细胞信号传输
背景情况:
- 腺二酸盐核糖转移酶 (ARTDs) 对细胞功能和疾病至关重要.
- 鉴定单个ARTDs的特定蛋白质点是具有挑战性的,因为功能冗余.
- 现有的方法很难在17个人类ARTD家族成员中区分目标.
研究的目的:
- 开发一种新的方法来识别单个ARTD家族成员的直接蛋白标.
- 克服功能冗余和ARTD之间的重叠特异性的挑战.
- 为了能够详细研究ARTD介导的细胞反应.
主要方法:
- 对直角NAD (((+) 模拟工程ARTD对的合理设计.
- 由工程ARTDs (ARTD1, -2, -6) 使用的一种正交NAD(+) 变体的合成.
- 亲和力净化与双重质谱相结合,以识别蛋白质标.
主要成果:
- 工程设计的ARTD选择性地使用了正交NAD (((+)) 变体.
- 对ARTD1 (PARP1) 和ARTD2 (PARP2) 的比较揭示了不同的但重叠的目标配置文件.
- 在核提取物中确定了42个直接的ARTD1目标和301个直接的ARTD2目标.
结论:
- 开发的正交NAD (((+) 模拟工程ARTD对提供了一个强大的新技术.
- 这种方法有助于识别单个ARTDs的直接蛋白质标.
- 能够更深入地了解ARTD通路激活和细胞结果.
