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从人-动物体细胞杂交物中分离人类转录的序列
P Liu1, R Legerski, M J Siciliano
1Department of Molecular Genetics, University of Texas, M.D. Anderson Cancer Center, Houston 77030.
Science (New York, N.Y.)
|November 10, 1989
概括
研究人员开发了一种新方法,利用内子拼接序列从混合细胞中分离特定的人类基因. 该技术有效地识别复杂基因组混合物中的基因序列,有助于基因映射和分析.
科学领域:
- 基因组学就是基因组学.
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 从跨种类混合细胞中分离特定的人类基因,由于人类DNA含量较低,因此存在重大挑战.
- 现有的方法可能缺乏有效地从复杂的基因组背景中分离基因所需的特异性.
研究的目的:
- 开发一种用于从人类-动物体细胞杂交体内的局部基因组区域选择性分离人类基因的新方法.
- 为了利用不成熟的信使RNA中特定物种的重复序列来进行向基因识别.
主要方法:
- 来自人类-动物体细胞杂交体的补充DNA (cDNA) 的制备,最小的人类DNA (<1%).
- 使用共识5'内子拼接序列作为原料来准未成熟,未拼接的信使RNA (mRNA).
- 对人类重复序列的衍生cDNA库进行了选,以识别和分离人类基因克隆.
主要成果:
- 从复杂的混合细胞背景中,成功地以预期的频率分离出人类克隆.
- 孤立的克隆表现出来自转录的人类基因的前体的特征,包括单复制序列.
- 北方 (RNA) 斑点上的杂交模式证实了孤立序列的性质.
结论:
- 开发的方法使人类基因从局部基因组区域在跨种杂交细胞中的选择性分离成为可能.
- 这种技术有效地利用未结合的mRNA中特定物种的重复序列,以有效地发现基因.
- 这些发现为混合细胞系统中的基因映射和分析提供了有价值的工具.