作为非自然氨基酸蛋白质的无痕净化标签的英特因
Solongo Batjargal1, Christopher R Walters, E James Petersson
1Department of Chemistry, University of Pennsylvania , 231 South 34th Street, Philadelphia, Pennsylvania 19104, United States.
Journal of the American Chemical Society
|January 28, 2015
概括
研究人员开发了一种方法,用非自然氨基酸分离全长蛋白质. 这种技术使用C端整因融合来克服蛋白质表达中常见的截断问题.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 合成生物学 合成生物学
背景情况:
- 通过停止编码子抑制结合非自然氨基酸的蛋白质表达通常受到过早终止 (截断) 的阻碍.
- 这种切断是由抑制器转移RNA和释放因子之间的竞争引起的.
- 将非自然氨基酸含有全长非自然氨基酸的蛋白质从截断的形式分离出来是具有挑战性的,特别是当非自然氨基酸在C端附近被纳入时.
研究的目的:
- 开发一种简单无痕的方法来分离含有非天然氨基酸的全长蛋白质.
- 为了克服因释放因子竞争引起的停止子抑制的局限性.
- 为了能够有效地净化所需的非天然氨基酸结合蛋白质,无论它们的位置如何.
主要方法:
- 使用C端的整体融合策略.
- 使用停止密码子抑制来将非自然的氨基酸纳入蛋白质.
- 开发一个净化协议,利用整体融合来分离全长产品.
主要成果:
- 成功展示了一种用非自然氨基酸分离全长蛋白质的方法.
- 通过C端蛋白融合,有效地阻止或允许从截断的蛋白质产品中分离出来.
- 该过程简单,无痕迹,适用于具有C端非自然氨基酸结合的蛋白质.
结论:
- 一个C端整因融合提供了一个有效的解决方案,以隔离全长的非自然氨基酸含有蛋白质.
- 这种方法增强了非自然氨基酸结合在蛋白质工程和合成生物学中的实用性.
- 开发的技术提供了一种可靠的方法,以获得改性蛋白质的同质制剂.
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