在单个活细胞中量化蛋白-mRNA相互作用
Bin Wu1, Adina R Buxbaum1, Zachary B Katz2
1Department of Anatomy and Structural Biology, Albert Einstein College of Medicine, Bronx, NY 10461, USA; Gruss-Lipper Biophotonics Center, Albert Einstein College of Medicine, Bronx, NY 10461, USA.
Cell
|July 4, 2015
概括
研究人员开发了一种新方法来追踪活细胞中的RNA-蛋白相互作用. 这项研究显示,与mRNA结合的邮码结合蛋白1 (ZBP1) 发生在核外,影响翻译调节.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物物理学的生物物理.
背景情况:
- 特定的结合蛋白对于调节mRNA的时空表达至关重要.
- 了解活细胞中的RNA-蛋白相互作用在亚细胞水平是解读基因表达控制的关键.
研究的目的:
- 开发和应用一种方法来表征单个活细胞中的RNA-蛋白相互作用,具有亚细胞分辨率.
- 量化邮码结合蛋白1 (ZBP1) 和核糖体与初级纤维细胞和神经元中的β-actin mRNA的结合.
主要方法:
- 结合内源单一RNA和蛋白质检测.
- 利用两光子光波动分析来测量蛋白质与mRNA的结合.
- 分析了初级纤维细胞和神经元的亚细胞区内的结合.
主要成果:
- 在活细胞中定量ZBP1和核糖体与β-actin mRNA结合.
- 发现ZBP1-mRNA结合在核中没有发生,这与之前的发现相矛盾.
- 观察到神经元与纤维细胞中的增强的周核ZBP1-mRNA相互作用以及与抗相关的细胞质ZBP1和核糖体结合.
结论:
- 这项研究为体内RNA-蛋白相互作用分析提供了一种新的方法.
- 与β-actin mRNA结合的ZBP1主要是细胞质的,而不是核的.
- 这些发现支持ZBP1抑制mRNA翻译的模型,直到外周释放,从而使核糖体结合.


