在菌体显示图书馆中的化学后翻译修改的无声编码
Katrina F Tjhung1, Pavel I Kitov1, Simon Ng1
1Department of Chemistry, University of Alberta , Edmonton, Alberta, Canada T6G 2G2.
Journal of the American Chemical Society
|December 20, 2015
概括
这项研究引入了"无声条形码",以追踪菌体显示的库中的多种化学后翻译修饰 (cPTM). 这种方法可以同时识别序列及其相关的cPTM,进步了体外选择技术.
科学领域:
- 生物化学
- 分子生物学
- 生物技术
背景情况:
- 使用菌体显示的体内选择很强大,但仅限于每个图书馆的单个化学后翻译修饰 (cPTM).
- 开发将多个cPTM纳入单个库的方法对于扩大分子发现的范围至关重要.
研究的目的:
- 在单个菌体显示库中同时编码和追踪多个cPTM的新方法.
- 证明这种方法在识别特定生物标的高亲缘关系联体中的实用性.
主要方法:
- 使用多余编码子的独特组合来创建用于编码多个cPTM的"静音条形码".
- 构建和化学修改混合库,使用硫胺,生物和曼诺斯修改的组合.
- 针对目标蛋白 (碳酸无水素,链素,康卡纳瓦林A) 进行分析,然后进行深度测序.
主要成果:
- 从混合库同时成功识别了丰富的序列及其相关的cPTM.
- 鉴定了一种强大的硫胺基改性联体 (硫胺基-WIVP) 对碳酸无水酶具有纳米亲和力 (Kd = 6.7 ± 2.1 nM).
- 在与相关目标对比时,显著丰富了特定的cPTM.
结论:
- 开发的"无声条形码"策略有效地实现了多个cPTM的体外选.
- 这种方法显著提高了识别具有所需化学修饰的特定配体的效率.
- 该方法很容易适应其他体外显示系统,如T7菌体或mRNA显示.
