相关实验视频
通过删除表面循环,增强了脂酶A2的活性和变化的特异性
O P Kuipers1, M M Thunnissen, P de Geus
1Department of Biochemistry, University of Utrecht, The Netherlands.
Science (New York, N.Y.)
|April 7, 1989
概括
从胰腺脂酶A2中去除表面循环,显著增强了它在zwitterionic基质上的催化活性,同时降低了负电荷基质上的活性. 这种蛋白质工程揭示了循环功能,而不会改变活性部位结构.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 酶学 是一种酶学.
- 结构生物学 结构生物学
背景情况:
- 胰腺脂酶A2 (pPLA2) 具有独特的表面环,这种环在蛇毒PLA2中不存在.
- 这种表面循环在PPLA2活性和基质特异性中的功能作用仍然在很大程度上未被描述.
研究的目的:
- 调查猪胰腺脂酶A2 (pPLA2) 中表面环 (残留物62-66) 的作用.
- 为了确定循环删除对酶动力学和基质结合的影响.
- 用X射线晶体学来阐明循环去除的结构后果.
主要方法:
- 蛋白质工程创建一个pPLA2突变缺乏残留物62-66.6.
- 酶动力学测定使用状 (zwitterionic) 和负电荷的莱西丁基质.
- 进行X射线晶体学以确定突变酶的三维结构.
主要成果:
- 删除62-66残留物并没有显著改变米塞尔的结合常量.
- 在zwitterionic lecithin基板上,催化活性增加了16倍.
- 在负电荷的基板上,活动减少了四倍以上;晶体分析显示了被删除区域的明确结构,与野生类型不同,没有活跃的地点改变.
结论:
- 表面环 (残留物62-66) 在调节胰腺脂酶A2的催化效率和基质特异性方面发挥着至关重要的作用.
- 这种循环增强了对zwitterionic基质的活性,并影响了对负电荷基质的偏好.
- 在循环删除后,活性部位的结构完整性得到维持,这表明了全调节.