在vivo中,使用工程类型变异的多种氨基标记特定区域的蛋白质
Jeff E Glasgow1, Marc L Salit1, Jennifer R Cochran2
1National Institute of Standards and Technology , Stanford, California 94305, United States.
Journal of the American Chemical Society
|June 10, 2016
概括
这项研究提出了一种使用工程酶变体的新蛋白质修饰方法. 这种方法使得即使在活体细菌中,也能有效地生产具有不同化学标签的功能化蛋白质,从而消除了净化需求.
科学领域:
- 生物化学
- 化学生物学
- 合成生物学
背景情况:
- 在温和条件下提供精确的生物结合.
- 现有的方法面临诸如高基质成本,标签复杂性,低产量和净化挑战等局限性.
研究的目的:
- 开发一种更具多样性和成本效益的化学酶蛋白修饰策略.
- 为了证明工程酶变异的广泛化学标记的实用性.
主要方法:
- 使用一种高度活跃的 Staphylococcus aureus sortase A 的工程变体.
- 使用最小的LPXTG标签来表达蛋白质.
- 应用各种商用小氨基,包括生物对角功能组,用于蛋白质标记.
- 在体外和活体大肠杆菌中进行标记反应.
主要成果:
- 设计的类酶A变体与各种小氨基体表现出杂乱的活性.
- 已成功标记具有多种功能组的蛋白质,包括生物对角蛋白.
- 在活体大肠杆菌中证明了蛋白质功能化.
- 该方法可以在没有额外的净化步骤的情况下直接生产标记蛋白质.
结论:
- 这种新的化学酶方法显著扩大了蛋白质功能化的工具包.
- 这种方法提供了一种简单,廉价和可扩展的方法来生产化学修饰的蛋白质.
- 在大肠杆菌中的体内应用简化了蛋白质生产和功能化工作流程.
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