使用原子力显微镜对单细胞中的微RNA进行可视化和量化
Hyunseo Koo1, Ikbum Park1, Yoonhee Lee1
1Department of Chemistry, ‡Division of Integrative Biosciences and Biotechnology, and §Department of Life Sciences, Pohang University of Science and Technology , 77 Cheongam-Ro, Nam-Gu, Pohang 37673, Korea.
Journal of the American Chemical Society
|August 17, 2016
概括
我们开发了一种敏感的原子力显微镜 (AFM) 方法来量化单细胞中的微RNA (miRNA). 这种技术精确地绘制了miRNA分布和表达水平, 进步了我们对细胞过程和癌症等疾病的理解.
科学领域:
- 分子生物学
- 纳米技术
- 细胞生物学
背景情况:
- 微RNAs (miRNAs) 是细胞过程的关键调节者.
- 改变miRNA表达与包括癌症在内的病理状况有关.
- 准确的单细胞miRNA量化对于了解miRNA功能至关重要.
研究的目的:
- 开发用于单细胞miRNA检测的直接和敏感方法.
- 量化miRNA拷贝数量并绘制纳米尺度上的分布图.
- 在细胞激活时调查miRNA表达的变化.
主要方法:
- 使用混合结合域 (HBD) 绑定的尖端的原子力显微镜 (AFM).
- 开发了用于个人miRNA定位的粘附力映射技术.
- 单个神经元和固定神经元样本中的量化miR-134拷贝数.
主要成果:
- 成功地定位和量化成熟的miRNA,使其与早产形式区分开来.
- 在激活的神经元中显示了miR-134表达的增加 (每1. 0×1. 0μm2的8-14副本).
- 在没有放大的情况下实现miRNA分布的纳米横向分辨率映射.
结论:
- AFM提供了单细胞miRNA量化和纳米尺度映射的可靠方法.
- 该技术可以研究miRNA动态对细胞刺激的反应.
- 使用不同的AFM尖端进行序列扫描,可进行多分析物 (miRNA,mRNA,蛋白质) 的综合性转录后调节研究.


