通过基因向在小鼠胚胎衍生干细胞中的位点导向突变发生
1Department of Biology, University of Utah, Salt Lake City 84112.
Cell
|November 6, 1987
概括
在小鼠干细胞中的基因向成功突变了HPRT基因. 同源重组效率取决于序列同源性,为基因突变研究提供了一种多功能方法.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
- 干细胞生物学 干细胞生物学
背景情况:
- 低氨酸脂转移酶 (HPRT) 基因对素代谢至关重要.
- 基因向允许精确修改干细胞中的内源基因.
- 开发高效的基因向策略对于遗传研究至关重要.
研究的目的:
- 在小鼠胚胎干细胞 (ES) 中开发和优化HPRT基因的基因向策略.
- 为了比较不同基因向载体设计的效率.
- 建立一个适用于任何基因的向突变的协议.
主要方法:
- 在小鼠ES细胞中,基因向使用一种被引入HPRT基因位点的尼奥米辛耐药性 (neor) 基因构造.
- 选择G418耐药殖民地,并选6-thioguanine耐药性,以确定成功的HPRT基因突变.
- 基因向替代和插入载体之间的基因向效率的比较,基于同质性的程度.
主要成果:
- 一部分耐尼奥米辛菌群 (1/1000) 也表现出对6-thioguanine的耐药性,表明成功的HPRT基因突变.
- 同源重组被证实是基因向的机制.
- 发现基因向效率高度依赖于向向量与内源性HPRT基因序列之间的同质程度.
结论:
- 开发的基因向协议通过同源重组有效地在小鼠ES细胞中突变HPRT基因.
- 矢量设计和序列同质性的程度显著影响基因向效率.
- 这种方法为针对各种基因的有针对性的突变发生提供了宝贵的工具.
更多相关视频
08:01Identification of Homologous Recombination Events in Mouse Embryonic Stem Cells Using Southern Blotting and Polymerase Chain Reaction
Published on: November 20, 2018
10:57CRISPR/Cas9-Mediated Highly Efficient Gene Targeting in Embryonic Stem Cells for Developing Gene-Manipulated Mouse Models
Published on: August 24, 2022
