酵母HAP2和HAP3激活剂都与CYC1上游激活部位UAS2结合,以相互依赖的方式

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 酵母遗传学 酵母遗传学
• 转录条例 转录条例 转录条例

背景情况:

• 酵母中的CYC1基因需要特定的调节元素来激活转录.
• HAP2和HAP3基因编码了参与这个过程的调节蛋白.

研究的目的:

• 研究HAP2和HAP3与CYC1上游激活部位 (UAS2UP1) 的结合机制.
• 为了确定HAP2和HAP3是否独立或相互依赖地与DNA结合.

主要方法:

• 使用酵母提取物进行电泳运动转移测试 (EMSA).
• 通过非自然化聚烯胺凝进行蛋白质-DNA复合物形成分析.
• 甲基化干扰足迹用于识别DNA结合位点.
• 使用融合蛋白 (HAP2/HAP3与β-galactosidase) 和突变菌株的蛋白质-DNA相互作用的分析.

主要成果:

• HAP2和HAP3都与UAS2UP1部位结合,形成一个单一的蛋白质-DNA复合体 (复合体C).
• 复杂C的形成取决于功能HAP2和HAP3基因的存在,这表明相互依赖的结合.
• 结合部位被确定为TGATTGGT,同类于在较高的真核生物中发现的CCAAT盒.

结论:

• HAP2和HAP3蛋白相互依赖地与UAS2UP1部位结合,形成一个单一的功能复合体.
• 这种相互依赖的结合机制对于CYC1基因的转录激活至关重要.
• 这些发现表明,转录调节的保存机制涉及多个基因产物,在不同的生物体中与特定的DNA序列结合.