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指纹图案表达在大肠杆菌中,并在体外折叠,直接与DNA特定结合
K Nagai1, Y Nakaseko, K Nasmyth
1MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK.
Nature
|March 17, 1988
概括
这项研究表明,SWI5蛋白质的分离的三指域需要来结合DNA. 仅仅这个域就足以对特定序列的DNA进行识别,突出了它在基因调节中的作用.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质-DNA相互作用
- 酵母遗传学 酵母遗传学
背景情况:
- 指图案是DNA结合域,存在于调节性蛋白质中,包括Xenopus转录因子IIIA (TFIIIA) 和酵母SWI5.5.
- 众所周知,TFIIIA的指可以结合DNA,这表明SWI5.5中的三个指具有类似的功能.
研究的目的:
- 研究指域在酵母转录激活剂SWI5.5的序列特异性DNA结合中的作用.
- 为了确定孤立的SWI5指域的金属要求和DNA结合特性.
主要方法:
- 在大肠杆菌中表达了SWI5的89氨基酸,三指域,作为可分割的融合蛋白.
- 在变质条件下净化了融合蛋白,并在体外重新折叠它.
- 利用DNase I保护试验来评估DNA结合的特异性.
主要成果:
- 对于SWI5指域对DNA的特定序列识别至关重要.
- 孤立的SWI5三指域显示出足够的序列特异性DNA结合活性.
- 实验系统允许直接研究分离的多的金属要求和DNA结合能力.
结论:
- 在SWI5蛋白中,三根手指对特定序列的DNA结合至关重要.
- 这种孤立的域在DNA识别中功能性活跃,支持其在转录调节中的作用.
- 这些发现为SWI5指域的DNA结合功能提供了直接证据.