RNA处理产生成熟的3'端酵母CYC1信使RNA在体外

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 酵母遗传学 酵母遗传学
• 处理RNA处理RNA处理

背景情况:

• 传递 RNA (mRNA) 3'端的精确形成对于真核生物的基因表达至关重要.
• 以前,转录终止被认为是产生成熟mRNA 3'端的主要机制.
• 了解参与酵母mRNA 3'末端形成的酶机制至关重要.

研究的目的:

• 研究Saccharomyces cerevisiae中负责产生iso-1-cytochrome c mRNA (CYC1) 的成熟3'端的酶活性.
• 描述酵母前mRNA处理中涉及的内核酶活动的性质和要求.
• 探索 mRNA 3' 末端生成的替代模型,涉及内核分裂和多基化.

主要方法:

• 用Saccharomyces cerevisiae的全细胞提取物化前体mRNA转录.
• 在体外切割产品的分析以确定准确性,效率和基质特异性.
• 评估腺三酸盐 (ATP) 的依赖性和特定突变对分裂活动的影响.

主要成果:

• 在酵母细胞提取物中发现了一种内核酶活性,能够在CYC1前mRNA的多基化部位或附近准确地分裂.
• 分裂活性显示出30-50%的效率,依赖ATP,并且特定于某些酵母前mRNA.
• 消除体内3'末端形成的突变也消除了观察到的体内裂变.
• 在细胞提取物中也检测到二次多基化活性.

结论:

• 酵母mRNA 3'端形成可能涉及一个内核分裂裂变事件.
• 酵母mRNA的成熟3'端可以通过内核分解裂变和随后的多基化的组合产生.
• 这种机制为生成功能性mRNA分子提供了转录终止的替代方案.