分子克隆和表达血小板的主要蛋白激酶C基质的分子克隆和表达
M Tyers1, R A Rachubinski, M I Stewart
1Department of Biochemistry, McMaster University, Hamilton, Ontario, Canada.
Nature
|June 2, 1988
概括
研究人员确定了P47蛋白,这对血小板激活至关重要. 这项研究分离了人类P47克隆,证实了其结构和进化保存,揭示了一种新型蛋白激酶C基质.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 细胞信号传递 细胞信号传递
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 血小板激活涉及蛋白质酸化,特别是由蛋白质激酶C (PKC) 进行的称为P47的蛋白质.
- 精确的身份和P47的功能一直是争论的主题,提出的角色包括脂质皮质蛋白和行动蛋白调节蛋白.
研究的目的:
- 为了隔离和描述人类P47.7.
- 确认P47序列及其与已知蛋白质的关系.
- 研究P47.7的进化保护和功能领域.
主要方法:
- 来自HL-60细胞的lambda gt11补充DNA库的免疫学查.
- 在白细胞系和分化HL-60细胞中进行信使RNA杂交研究.
- 开放式读取框架分析,大肠杆菌中的重组蛋白质表达和体外表达.
主要成果:
- 人类P47克隆成功分离出来.
- 一个1,050 bp的开放读取框架编码一个Mr40,087蛋白质被识别并确认.
- P47序列在脊椎动物中显示了保护性,并且与之前提出的身份缺乏相似性,具有EF手和PKC酸化动机.
结论:
- P47是一种独特的蛋白质,以前没有识别过脂质皮质或酸盐脱酶子单元.
- 脊椎动物中保留了P47序列,这表明它具有重要的生物学作用.
- P47含有功能域,表明结合和PKC调节.


