一种哺乳动物宿主-载体系统,通过温度诱导来调节传染基因的表达和放大

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 病毒学 病毒学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 类似病毒40 (SV40) 转变对于DNA复制研究至关重要.
• 对温度敏感的突变物是研究基因功能的宝贵工具.
• 控制载体DNA复制对于基因操纵至关重要.

研究的目的:

• 开发具有温度依赖调节载体DNA复制的猿类细胞.
• 描述表达热可移 SV40 大T抗原的细胞系 (ts COS细胞).
• 建立一个可控制的环节性和集成载体DNA维护系统.

主要方法:

• 用SV40转换的猿类细胞的分离和表征.
• 使用Rous瘤病毒长端重复用于转录控制.
• 评估SV40 A基因突变者的补充.
• 评估不同温度 (33°C与40°C) 的载体DNA复制.

主要成果:

• 已建立的TS COS细胞系表现出温度依赖的复制控制.
• 证明了高水平的可热化大T抗原的产生.
• 确认了SV40 A基因突变的补充.
• 在33°C显示支持含有SV40来源的载体复制,但在40°C则不支持.

结论:

• ts COS细胞为调节载体DNA复制提供了一个新的系统.
• 根据温度调节T抗原活性,可以控制等离子体DNA拷贝数.
• 可选择的矢量序列可以作为集成的DNA或情节保持.